一、 仪器介绍

实验（yàn）目的：

确定重复接触受试（shì）物对哺乳动物是否可（kě）引起皮（pí）肤变（biàn）态反应及其程度

试验概述：  

部封闭（bì）涂皮试验Buehler test，BT和豚鼠值试（shì）验uinea pig maximisation test，GPMT是实验动物通过多次皮肤涂抹诱导接触（chù）或皮内注射受试物10d~14d诱导阶段（duàn）后,给予激（jī）发剂量（liàng）的受试物,观察实验动物,并与对照动物比较对激发接触受（shòu）试物的皮肤反应强度（dù）。

小鼠部淋巴结分析试验locallymph node assay，LLNA是通过耳部给予实验动物受试物（wù）,引起淋巴结的淋巴细胞增生,淋巴细胞增生与受试物剂量过敏程度成比例。利用放（fàng）射性标记方法,测定试验组与对照组淋巴细胞的标记率,并进行对比（bǐ）,获得刺激指数,评（píng）价致敏强度。

应（yīng）用范围（wéi）

应用于科研、农业、卫生、教育、雾霾状态可吸入颗粒染毒效果研究等各个领域

符合标准：

GB/T 15670.9-2017《农药（yào）登记毒理学试验方（fāng）法第9部分皮肤（fū）变态反应致（zhì）敏试验》

二、试验（yàn）步骤:

1. Buehler TestBT 

动物模型:豚鼠

操作步骤:

诱导阶段（duàn）:通过封闭式皮肤涂抹（mò）受试物，持续（xù）10-14天。激（jī）发阶段:间隔后再次涂抹受试物，观察皮肤反应。

观察指标:红斑、水肿等皮肤炎症反应的强度（dù）(主观（guān）评（píng）分)

优点:

模拟（nǐ）人类皮（pí）肤接触途径，适用于部制剂(如化妆品、外用药（yào）物)

无需注射，操作相对温和。0

缺点:

敏感性较低，可能（néng）漏检弱致敏（mǐn）物（wù），。依赖（lài）主观（guān）评分，存（cún）在实验者偏差。0应用场景:传统化妆品、外用药品的安（ān）全性评估。

2.豚鼠值试验GPMT

动物模型:豚鼠

操作步骤:

诱导阶段:皮内注射受试物常联合弗氏完全佐剂（jì）结合（hé）皮肤涂抹，持续10-14天。

激发阶段（duàn）:再（zài）次涂抹受（shòu）试物，评估皮肤（fū）反（fǎn）应。

观察指标:与（yǔ）BT类似，但反应更强烈（liè）(红斑、水肿、硬结)

优点（diǎn）:

敏感性高，可（kě）检测强致敏物（wù）和弱致（zhì）敏物

国际的“金标准”，尤其适（shì）用于化学品和工业原料。

缺点:

使用佐（zuǒ）剂可能引发过度免疫反应，导致假阳性

动物痛苦程度较高，伦理争议较大。

应用场景（jǐng）:工业化学品、强致敏性物质(如染发剂、橡胶添加剂)的（de）严格检（jiǎn）测。

3.小鼠部淋（lín）巴结试验LLNA

动物（wù）模型:小鼠.

操作步骤:

诱导阶段（duàn）:连续3天耳部涂抹受试物。

检测指标:通过3H-胸苷或BrdU标记增殖的淋巴细胞，计算刺激指数SI观察（chá）指标:淋巴结淋（lín）巴细胞增殖程度SI>3判为阳性

优点:

客观（guān）定量:减（jiǎn）少主观评分误差；

符合3R原则:动物用量少（shǎo），无需激（jī）发阶段，痛苦小

高效快速:试验周期短（duǎn）(约1周)。

缺点:

对某（mǒu）些（xiē）物质(如金（jīn）属盐)敏感性不足，需使（shǐ）用放射性物质或（huò）特殊设备，成本较高。

应用场（chǎng）景:欧盟等法规优先（xiān）的替（tì）代方法，广泛用于药品、化妆品及（jí）化（huà）工产品（pǐn）的初筛。