一、 儀器介紹

實驗目的：

本試（shì）驗用（yòng）於檢測受（shòu）試物對體外培養的（de）哺乳動物細（xì）胞的基因（yīn）突變作用,包括堿基對突變、移碼突變（biàn）和缺失（shī）等（děng）,從而評價受試物引（yǐn）起突變的可能性

實驗概述（shù）：

本試（shì）驗屬正向突變試驗,可檢出（chū）堿（jiǎn）基置（zhì）換（huàn）型致突變物（wù）和移碼（mǎ）型致突變物。在加入（rù）和（hé）不加入代謝活化（huà）係統的條件下,使細胞暴露於受試物一定時間,然（rán）後將細胞傳代培養。胸苷激酶水平正常的細胞對三氟胸苷（trifluorothymidine,TFT）等敏感,因（yīn）而在培養液中不能生長分裂,突變細胞則不敏感,在含有三（sān）氟胸苷（gān）的選擇性培養液中能繼續分裂並形成集落（luò）。相似的,次黃嘌呤鳥嘌呤（lìng）磷酸核糖基酶(HPRT)正常的細胞對 6-硫代鳥嘌呤（6-thioguanine,6-TG）敏感,突（tū）變的細胞則不敏感,在含有（yǒu） 6-硫代鳥嘌（piào）呤的選擇（zé）性培養液中可（kě）生長形成集落。基於突變集（jí）落數,計算突變頻率以評價受（shòu）試物的致（zhì）突變性。

應用範圍

應用於（yú）科研（yán）、農業、衛生、教育、霧霾狀態可吸入顆粒染毒效果研究（jiū）等各個領域

符合標準：

GB/T 15670.20-2017《農藥登記毒理（lǐ）學（xué）試驗方法第20部分:體外哺乳（rǔ）動物細胞基（jī）因突變試驗》

二、試驗流程（chéng）

1）細胞（bāo）培養:

選擇合適細胞係（如L5178Y、CHO），常規傳代培養

2）受試物處理:

暴露於不同濃度受試物（需設陰性/陽性對照）

3）表（biǎo）達期:

預留足夠時（shí）間（通常7-10天）使（shǐ）突變表型顯現。

4.）突變體篩選:

TK試（shì）驗:使用（yòng）三氟胸苷（TFT）篩選TK突（tū）變體。

HPRT試驗:使用6-硫代鳥嘌呤（6-TG）選HPRT突變體。

5）克隆形成分析:

計（jì）數（shù）突變（biàn）集落，計算突變頻率（突變集落數/存活細胞數）

6）數據統計:

與對（duì）照組比較（jiào），判斷突變率是否顯著增加。

三、注意事項

1）細胞活力控製:受試物濃度需保證細胞存活率（通常>50%）

2）代謝活化係統（tǒng）:需加（jiā）入S9混合物(模擬體內代謝，（如Aroclor 1254誘導的大鼠肝S9）。

3）假陽性/陰性:避免pH、滲透壓等非特異性（xìng）因素幹擾。

4）合規性:   遵（zūn）循國際指南（如OECD 490、ICH S2R1）。

計算：